基因克隆中酚抽提法的具体步骤如下:
在DNA样品中加入等体积的TE饱和的酚氯仿,对于1.5 ml的微量离心管,总体积不应超过500 μl。
剧烈振荡20秒。
样品在室温离心5分钟,分相。这个步骤不需要很高的转速,但通常用最高转速比较方便。小心地从离心机中取出样品,不要搅动分开的两相。
在不搅动蛋白质层的情况下,用移液器小心地将尽量多的水相转移到新的离心管中。
向水相中加入等体积的氯仿,重复步骤2、3和4。
为了提高产量,如果觉得没有得到足够的水相,可以在酚相加入与酚相等体积的pH 7.5的TE,对酚相再次抽提、振荡、离心。
以上步骤完成后,可以获得DNA。请注意,这些步骤需要在实验室环境中进行,并且需要相应的实验技能和经验。同时,确保遵守实验室的安全规定和操作规程,以避免可能的危险和误差。
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