基因克隆技术中的DNA提取可以采用多种方法,下面列举一些常见的方法:

  1. 酚抽提法:先用蛋白酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯萃取,高速离心后取上清,得到DNA。

  2. 甲酰胺解聚法:破碎细胞后,用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA。

  3. 玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒,生成DNA。

  4. 异丙醇沉淀法:用二倍容积异丙醇替代乙醇,可去除小分子RNA,得到DNA。

  5. 表面活性剂快速制备法:用TritonX-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析得到DNA。

此外,还有一些其他方法,如高盐法、硅胶柱提取法、循环盐提取法、醇沉淀法、热碱法等。

以上方法各有特点,选择哪种方法取决于实验的具体需求和条件。无论采用哪种方法,都需要注意操作过程中的细节,以避免DNA的降解和损失。同时,提取得到的DNA纯度也需要满足实验要求,如果纯度不够,可能需要进行进一步的纯化。

参考:
  • 1.基因克隆操作方法有哪些_百度文库